Arquitecturas de sistemas de transporte de lípidos para la membrana externa bacteriana

Además de los defectos de OM, los mutantes mla muestran fenotipos que pueden correlacionarse con el estrés de OM, incluida una mayor producción de carbohidratos extracelulares como lo demuestra la tinción con violeta cristal de las películas tras el crecimiento en caldo de cultivo (Figura 1 – Figura suplemento 1A). Estos datos indican un papel de Mla en el mantenimiento de la barrera de la membrana externa de A. Muchos transportadores ABC de bacterias de doble membrana emplean pequeñas proteínas de unión al sustrato que facilitan el reconocimiento del sustrato y el tráfico a través del periplasma. Aunque MlaC no tiene similitud de secuencia con las familias convencionales de proteínas de unión al sustrato, es parte del operón mla y se dirige al periplasma por una secuencia señal N-terminal. Por lo tanto, MlaC puede desempeñar un papel en el transporte de sustratos hacia o desde el complejo transportador MlaFEDB.

Un virus puede crear un sistema de transporte sofisticado en las bacterias

Estas mutaciones en los operones pqi y yeb aumentaron la sensibilidad de las bacterias a SDS al 0,5% EDTA 1,25 mM. También construimos un mutante triple que carece de la subunidad de permeasa putativa de cada operón (ΔmlaE ΔpqiA ΔyebS). El mutante de triple permeasa es viable y no muestra ningún defecto de crecimiento discernible en relación con el tipo salvaje en medio LB líquido. Por lo tanto, los sistemas Mla, Pqi y Yeb no son esenciales para el crecimiento de E.

Proteínas de dominio Mce: funciones establecidas y previstas

El mutante ΔmlaE ΔpqiA ΔyebS exhibió una sensibilidad a SDS EDTA similar a la del mutante único ΔmlaE. Pero a diferencia de cualquiera de los mutantes individuales, el triple mutante blanqueardientes.org es más susceptible a los factores estresantes de la membrana externa, ya que esta cepa es especialmente sensible al 5% de SDS solo e, inesperadamente, al CaCl2 100 mM.

Sin embargo, estamos totalmente en desacuerdo con la afirmación del revisor de que es imposible conciliar estas observaciones con un modelo de transporte anterógrado. Se han realizado experimentos de persecución de pulsos para demostrar que el sistema ortólogo en el cloroplasto de la planta funciona para transportar GPL que se origina en el retículo endoplásmico hacia el interior del cloroplasto para su eventual entrega a la membrana tilacoide dentro del cloroplasto. Las bacterias Gram-negativas que estamos discutiendo aquí no están contenidas dentro de una célula eucariota expuesta a orgánulos como el ER que podrían ser una panelessolares-precios.com fuente de GPL. Por lo tanto, no nos resulta difícil imaginar que este sistema ortólogo podría haber evolucionado para tener una funcionalidad inversa en el cloroplasto de lo que observamos aquí en A. En «El sistema Acinetobacter baumannii Mla y el transporte de glicerofosfolípidos a la membrana externa», Kamischke et al. informan que el sistema Mla previamente caracterizado funciona de manera anterógrada. Los autores utilizaron una biblioteca de transposones para identificar los genes necesarios para la integridad de la OM en A. baumannii mediante el seguimiento de la liberación de una fosfatasa periplásmica endógena.

Este trabajo revela diversas arquitecturas de canales basados ​​en proteínas altamente conservados implicados en el transporte de lípidos entre las membranas internas y externas de las bacterias y algunos orgánulos eucariotas. 1) El estudio de Powers y Trent se publicó en PNAS después de que enviamos este manuscrito a eLife y, como tal, no se ha abordado en versiones anteriores. Tenemos la intención de revisar el manuscrito para comentar estos datos y abordar las conclusiones de los autores de que sus datos reflejan evidencia de una función de transporte retrógrado para Mla en Acinetobacter baumannii.

Se requerirán más estudios para identificar componentes adicionales que puedan funcionar junto con YebST y PqiABC. Se desconoce cómo se transportan los fosfolípidos entre las membranas internas y externas de las bacterias a través del espacio hidrófilo intermedio del periplasma. Aquí informamos que los miembros de la familia de proteínas de entrada de células de mamíferos forman anillos y cilindros hexaméricos estructuralmente diversos con un canal central capaz de mediar el transporte de software mantenimiento lípidos. coli, MlaD, forma un anillo como parte de un complejo transportador ABC más grande en la membrana interna y emplea una proteína soluble de unión a lípidos para transportar lípidos entre MlaD y un complejo proteico de la membrana externa. coli muestran que YebT forma un tubo alargado que consta de siete anillos MCE apilados y PqiB adopta una arquitectura similar a una jeringa. Tanto YebT como PqiB crean canales de longitud suficiente para abarcar todo el espacio periplásmico.

Las mutaciones en los genes mla dan como resultado una mayor sensibilidad a una combinación de SDS y EDTA (SDS EDTA), lo que sugiere un defecto leve de OM, que se ha atribuido a una pérdida de asimetría de OM. Para evaluar si otras proteínas MCE están involucradas de manera similar en el mantenimiento de la OM o en la biogénesis, construimos cepas de E. coli con deleciones únicas de los genes pqiB y yebT que codifican MCE, o sus genes de permeasa putativos asociados, pqiA y yebS.

También observaron alteraciones frecuentes en pldA, que codifica una fosfolipasa de la membrana externa, así como en otros genes de la envoltura. Para estudiar más a fondo estos efectos, luego introdujeron deleciones limpias de mlaE y pldA en ATCC 19606, y seleccionaron bacterias deficientes en LOS mediante placa en polimixina B. Estos mutantes dobles demostraron un mejor crecimiento y resistencia a los antibióticos, pero continuaron mostrando una morfología celular alterada . Las mutaciones en mlaE en un fondo deficiente en LOS también mostraron por RNA-seq que estaban reguladas diferencialmente para 120 genes. El análisis bioinformático predice que los genes mlaC y mlaF codifican respectivamente el componente periplásmico soluble y el componente ATPasa citoplásmico del sistema de transporte ABC, y decidimos centrarnos en mutantes de estos genes para experimentos adicionales para dilucidar la función del operón mlaFEDCB. Las deleciones cromosómicas se crearon mediante intercambio alélico, y estas mutaciones dieron como resultado defectos de permeabilidad de la MO según lo medido por ensayos de captación de EtBr. Complementamos el defecto de OM para los mutantes de deleción ∆mlaC y ∆mlaF reparando el evento de deleción original en el cromosoma y confirmamos la complementación del defecto de permeabilidad observado.

Las estructuras de dos posibles homólogos de MlaC fueron depositadas previamente por el Northeast Structural Genomics Consortium sin publicaciones asociadas (2QGU y 4FCZ; 27% y 22% de identidad de secuencia y Cα rmsd de 2.5 Å y 3.0 Å con E. coli MlaC, respectivamente) . solanacearum también se cristalizó con un ligando oracionesasanalejo.com de origen desconocido unido en su bolsillo hidrofóbico, que se modeló como fosfatidiletanolamina. Basándose en estas estructuras, se ha propuesto que las proteínas similares a MlaC pueden funcionar como proteínas de unión a sustrato periplásmico para el transporte de lípidos u otras moléculas hidrófobas.

• El tráfico posterior a través del periplasma implica entonces a la proteína de unión a GPL periplásmica MlaC, que probablemente acepta GPL de MlaD y luego las lleva al OM.
• baumannii Mla es el tráfico de GPL desde el MI, a través del periplasma, para su entrega a la membrana externa.
• Por tanto, estos resultados nos llevan a proponer que la función del sistema A.
• De acuerdo con este modelo, la hidrólisis de ATP por MlaF proporciona la energía inicial para extraer GPL del MI, mientras que los componentes de unión al sustrato MlaD y MlaC absorben lípidos para entregarlos al MO.

baumannii fuera cada vez más sensible a una variedad de antibióticos según lo determinado por las mediciones de MIC. El aumento de la sensibilidad a los antibióticos cuya captación no está mediada por porinas OM es consistente con un efecto directo sobre el componente de la membrana de la barrera de permeabilidad OM (Nikaido, 2003; Vaara, 1992).