Avances en los sistemas de transporte de electrones bacterianos y su regulación, volumen 68

No estamos seguros de que PagP solo esté activo en GPL en el prospecto exterior. Sin embargo, puede haber una migración de GPL a la valva exterior en el marco del defecto de la membrana exterior de los mutantes Mla. Incluso es posible que MlaA pueda funcionar para mantener la asimetría de lípidos uniendo GPL en la membrana externa y presentándolas cuentos-infantiles.net a las fosfolipasas y podría funcionar como un receptor de MlaC para transportar a la membrana externa. Lo que parece poco probable es que exista un transporte retrógrado de la GPL de regreso a la membrana interna. La PagP y las fosfolipasas pueden funcionar y el sistema también puede transportarse desde la membrana interna a la membrana externa.

Clonación y purificación de la proteína Piua

Estos resultados demuestran un requisito de hidrólisis de ATP por MlaF para el mantenimiento de la función de barrera de la OM en A. baumannii, e indican que los fenotipos de mutantes de deleción probablemente fueron el resultado de una falta de función de transporte, en lugar de la formación de una proteína de membrana incompleta tóxica. simetría a través de la eliminación de GPL del prospecto exterior del OM al MI. Si bien esta es una hipótesis razonable, no hay evidencia bioquímica directa de que el sistema Mla funcione para devolver la GPL del OM al IM. Dada la amplia conservación de Mla en organismos diderm procarióticos, la función de tráfico anterógrado de Mla podría ser explotada por una variedad de especies.

Es importante señalar que los datos presentados en la Figura 7 del artículo original no son una representación del valor absoluto de los fosfolípidos recién sintetizados. En cambio, presentamos en el eje y la relación molar de glicerofosfolípido marcado con C13 recién sintetizado y glicerofosfolípido sin marcar. Los datos se presentan de esta manera para limitar la necesidad de normalización a algo como el contenido de proteína de la membrana, que podría argumentarse que no es confiable dado que se ha demostrado que estas mutaciones alteran gravemente la membrana externa. Sin embargo, reconocemos que esta forma de presentación puede causar una confusión innecesaria sobre el ensayo, por lo que hemos agregado cifras adicionales para mostrar la cantidad relativa de GPL recién sintetizada en las membranas interna y externa de A. baumannii de tipo salvaje y mutante con la esperanza que esto representará más claramente los datos. Como se detalla a continuación, los datos muestran claramente que en los mutantes mla, la GPL recién sintetizada se acumula en la membrana interna. Primero, los autores llevaron a cabo un cribado genético para identificar genes importantes para la integridad de la OM en Acinetobacter baumannii, un patógeno oportunista.

Proteína

Se requieren más investigaciones para desentrañar sus contribuciones en el transporte de ácido monocarboxílico. Con algunas excepciones, las bacterias carecen de orgánulos unidos a la membrana como los que se encuentran en los eucariotas, pero pueden ensamblar proteínas en varios tipos de inclusiones, como vesículas de gas y gránulos de almacenamiento.

En los procariotas, los importadores median en la absorción de nutrientes por la célula. Los sustratos que pueden transportarse incluyen iones, aminoácidos, péptidos, azúcares y otras moléculas que son en su mayoría hidrófilas. La región que atraviesa la membrana del transportador ABC protege los sustratos hidrófilos de los lípidos de la bicapa de la membrana, proporcionando así una vía a través de la membrana celular. En las bacterias gramnegativas, los exportadores transportan lípidos y algunos polisacáridos desde el citoplasma hasta el periplasma. Los exportadores o eflujos, que están presentes tanto en procariotas como en eucariotas, funcionan como bombas que extruyen toxinas y fármacos fuera de la célula. El tercer subgrupo de proteínas ABC no funciona como transportadores, sino que participa en los procesos de traducción y reparación del ADN. Las bacterias gramnegativas son generalmente más resistentes que las bacterias grampositivas a los antibióticos, detergentes y otras sustancias químicas tóxicas debido a la sofisticada asimetría de lípidos en sus membranas externas, lipopolisacáridos en la valva exterior y fosfolípidos en la valva interior.

Estos genes MCE son parte de tres operones diferentes, cada uno de los cuales también codifica una proteína transmembrana de múltiples pases. Los genes mlaFEDCB funcionan junto con una lipoproteína OM, MlaA, codificada en otra parte del genoma. Aquí presentamos las estructuras de rayos X y EM de las tres proteínas MCE de E. Una proteína MCE, MlaD, forma un anillo homo-hexámero, es parte de un complejo lasaromaterapias.com de múltiples proteínas mucho más grande en el MI e interactúa con una proteína que transporta lípidos solubles, que probablemente sirve como un intermediario que transporta los lípidos entre los complejos de transporte en el IM y el OM. Las distintas arquitecturas de estas proteínas MCE sugieren múltiples estrategias para mover los lípidos a través del entorno hidrofílico del periplasma.

Las bacterias pueden tener una sola membrana plasmática (bacterias Gram-positivas) o una membrana interna más una membrana externa separada por el periplasma (bacterias Gram-negativas). También pueden quedar atrapados en el periplasma o secretarse al medio, según haya o no una membrana externa. Además, las bacterias pueden apuntar a proteínas dentro o a través de la membrana externa. Los sistemas para secretar proteínas a través de la membrana externa bacteriana pueden ser bastante complejos. Estos sistemas pueden describirse como secreción de tipo I, secreción de tipo II, etc. En la mayoría de las bacterias grampositivas, ciertas proteínas se dirigen a la exportación a través de la membrana plasmática y la posterior unión covalente a la pared celular bacteriana. Los transportadores ABC se dividen en tres categorías funcionales principales.

Examinaron una biblioteca de mutantes de transposones en busca de colonias con lesiones en la OM, razonando que las bacterias con una OM alterada permitirán que el sustrato cromogénico XP alcance el periplasma donde puede ser degradado por una fosfatasa, produciendo un color azul. Esto los llevó a identificar mutantes con inserciones de transposones en genes que codifican componentes centrales del sistema Mla. coli, donde se propuso que desempeñara un papel en el mantenimiento de MO, transportando GPL desde el OM de regreso al IM. Los autores también confirmaron que el fenotipo exhibido por los mutantes resultó de una falta de función de transporte y luego utilizaron cryoEM para caracterizar la estructura del complejo MlaBDEF. Por lo tanto, creamos una versión de la secuencia codificante de MlaF con una sustitución de leucina del residuo de lisina de Walker A, y luego clonamos el mlaF mutado en el vector pMMBkan de baja copia bajo el control del promotor nativo de mlaF. baumannii fuera más sensible a una variedad de antibióticos, lo que dio como resultado MIC reducidas en comparación con A. Por lo tanto, la expresión de una ATPasa defectuosa da como resultado un mutante dominante negativo con un fenotipo comparable a la deleción de componentes del operón mla.

• Los autores asumen que las mutaciones mla y pldA tienen el efecto de estabilizar una membrana externa simétrica producida en ausencia de LOS al permitir que GPL llene la valva externa, lo que resulta en un mejor crecimiento y resistencia a los antibióticos.
• Dado que los datos sugieren que Mla y PldA se seleccionan en contra cuando LOS está ausente, el examen del contenido de GPL de la membrana externa podría haber apoyado las conclusiones de los autores si revelara un aumento en GPL en mutantes mla y pldA.
• Señalaríamos que en sus datos falta el examen del perfil de glicerofosfolípidos de membrana en sus mutantes deficientes en LOS.
• En ausencia de tales datos, no es obvio para nosotros que los autores hayan descartado suficientemente explicaciones alternativas para sus fenómenos observados.

En condiciones de estrés, esta asimetría puede alterarse y provocar el desprendimiento de LPS y la migración de fosfolípidos a la valva exterior. Estos parches de bicapa de fosfolípidos conducen a una función de barrera reducida y son perjudiciales para la célula. Recientemente se ha identificado una vía de 6 proteínas, la vía Mla, que se sugiere para prevenir activamente la acumulación de fosfolípidos en la superficie celular. La eliminación de cualquier componente de esta vía conduce a defectos de la barrera de la MO y una mayor susceptibilidad a los agentes antibióticos, además de abolir también la virulencia. Por tanto, todos los componentes de la vía Mla son importantes factores de virulencia. Además, la evidencia reciente del laboratorio de Knowles sugiere que esta vía también puede transportar lípidos hacia la membrana externa y, por lo tanto, proporciona la primera evidencia de un mecanismo de cómo los lípidos llegan a la membrana externa. nducible B) y yebT (gen de función desconocida; también conocido como MAM7).