El premio Nobel de Medicina es para el descubrimiento del transporte celular

NSm se dirige predominantemente al RE, donde probablemente se acumula dentro de la célula vegetal. Las inclusiones de NSm se detectaron fácilmente cuando NSm se expresó transitoriamente después de la agroinfiltración. Sin embargo, los cuerpos de inclusión de NSm no se observaron en las células de las que NSm traficaba a las células adyacentes en el ensayo de bombardeo biolístico, lo que sugiere que los cuerpos de inclusión probablemente se deben a la acumulación de NSm en el RE. Aunque todavía no sabemos si los cuerpos de inclusión de NSm tienen alguna otra función biológica para TSWV, estos cuerpos de inclusión son un indicador confiable de la focalización de NSm en el RE. El mutante NSm4A / 5A que no indujo inclusiones de ER no estaba en la misma fracción de gradiente de sacarosa que el ER, y era defectuoso en el tráfico de célula a célula, lo que respalda aún más que dirigirse al ER es un paso importante para su movimiento intercelular.

Descripción general del transporte a través del epitelio intestinal

Difusión

Con una sólida evidencia bioquímica, celular y genética, demostramos que el sistema de transporte de membrana ER de la planta sirve como una ruta directa importante para el tráfico intercelular de NSm y TSWV. Nuestros hallazgos tienen nuevas implicaciones importantes para los estudios mecanicistas del tráfico intercelular de tospovirus y otros virus vegetales de ARN multipartito mantenimiento de flota de hebra negativa. Los virus de las plantas pueden utilizar diferentes mecanismos de transporte de células huésped para moverse de una célula a otra a través de plasmodesmos. La contribución de los sistemas de transporte de la célula huésped al movimiento intercelular de virus vegetales de ARN multipartito de cadena negativa, incluidos los tospovirus, es poco conocida.

El tratamiento con una concentración baja de BFA que provoca la redistribución de un marcador de Golgi de regreso al RE no afectó el movimiento intercelular de NSm. Aunque los sistemas de transporte del citoesqueleto son importantes para el movimiento intercelular de muchos MP y virus [28,30,36-40]. Nuestro análisis de tratamiento farmacéutico mostró que los microfilamentos, motores de miosina y microtúbulos no están involucrados en el movimiento de célula a célula de TSWV NSm. Sin embargo, mostramos anteriormente que las nucleocápsidas de TSWV, el componente principal del VRC, se mueven intracelularmente a lo largo del RE y los microfilamentos de actina.

El ER de la planta es una estructura única que está interconectada entre las células a través de los desmotúbulos del ER en el plasmodesma a través de la pared celular, formando una red ER continua en toda la planta. En el presente estudio, utilizando sistemas in vitro e in vivo para caracterizar las propiedades de asociación de membrana de las proteínas de movimiento, revelamos que TSWV NSm estaba física y estrechamente asociado con la membrana del RE y se transmite de una célula a otra. Aprovechando estas características de TSWV NSm, investigamos la contribución del sistema de transporte de membrana ER de la planta al movimiento intercelular de NSm MP y TSWV.

Se descubrió que los microfilamentos de actina y la miosina XI-K eran responsables del movimiento intracelular de la nucleocápside TSWV y del virus para infectar la planta. En el presente estudio, demostramos que el sistema de transporte de membrana ER es fundamental para el tráfico intercelular de NSm MP y TSWV. Nuestros hallazgos tienen nuevas implicaciones importantes para orientar los futuros estudios mecanicistas sobre el tráfico intercelular de tospovirus y otros virus de ARN de plantas de hebra negativa multipartita. benthamiana se movió de manera eficiente de una célula a otra, lo que está respaldado por el hecho de que huertasencasas.com TSWV NSm puede aumentar el límite de exclusión de tamaño de la PD. Sin embargo, el SEL dilatado de la PD en sí no es suficiente para soportar el movimiento de célula a célula de proteínas citoplasmáticas como GFP-GFP (54,0 kDa) en presencia de NSm. Como mencionamos anteriormente, NSm está física y estrechamente asociado con la membrana del RE. Las mutaciones en NSm que interrumpieron su asociación con la membrana del RE o causaron una clasificación incorrecta en otra localización subcelular inhibieron el tráfico de célula a célula, lo que sugiere que la orientación al RE es un paso crítico para el movimiento de célula a célula.

Para probar si la rotura de la membrana del RE por el tratamiento con BFA afecta el movimiento de célula a célula de NSm, los tejidos foliares bombardeados de N. benthamiana que expresan transitoriamente NSm-GFP se trataron con 20 μg / ml de BFA o DMSO 6 h después del bombardeo para 12 h, y se comprobó el tráfico de célula a célula de NSm-GFP mediante microscopía confocal. Como se muestra en la Tabla 2, el 37,9% de los focos mostró fluorescencia multicelular de la proteína de fusión NSm-GFP en tejidos de hojas de control tratados con DMSO, en contraposición a un porcentaje mucho menor (10,9%) de dichos focos observados en hojas tratadas con BFA. Por tanto, el tratamiento con BFA inhibió significativamente sueñoss.net el tráfico de célula a célula de NSm-GFP. Para probar si esta inhibición es el resultado de una interrupción general del transporte a través de la EP, analizamos el tráfico de célula a célula de GFP, que se mueve libremente entre las células epidérmicas de las hojas. Como se muestra en la Tabla 2, el tráfico de célula a célula de GFP, que muy probablemente ocurrió a través de los microcanales formados entre la membrana plasmática y el RE con PD, no se vio afectado por el tratamiento con BFA en comparación con el tratamiento con DMSO. Por tanto, el tratamiento con BFA no afectó al transporte general a través de la EP, pero interrumpió específicamente el tráfico de célula a célula de NSm.

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• La membrana plasmática crea una pequeña deformación hacia adentro, denominada invaginación, en la que se captura la sustancia a transportar.
• La endocitosis requiere energía y, por lo tanto, es una forma de transporte activo.
• La endocitosis es una vía para internalizar partículas sólidas («ingestión de células» o fagocitosis), pequeñas moléculas e iones («ingestión de células» o pinocitosis) y macromoléculas.
• La deformación luego se desprende de la membrana en el interior de la célula, creando una vesícula que contiene la sustancia capturada.

Este sistema utiliza membranas microsomales derivadas de ER y proporciona una forma sensible de detectar la inserción o translocación de regiones hidrófobas a través del translocón Sec. El sistema se basa en la glicosilación cotraduccional realizada por la enzima oligosacariltransferasa. OST agrega residuos de azúcar a las secuencias de consenso después de que la proteína emerge del canal translocón. La glicosilación de una región proteica traducida in vitro en presencia de membranas microsomales indica, por tanto, la exposición de esta región al sitio activo de OST en el lado luminal de la membrana del RE.

En nuestro ensayo experimental, un segmento hidrófobo que se va a analizar (probado con HR) reemplaza el segundo segmento de TM de la proteína de membrana integral Lep. El sitio aceptor de glicosilación ubicado al comienzo del dominio P2 se modificará solo si el segmento probado por HR se inserta en la membrana, mientras que el sitio G1, incrustado en una secuencia N-terminal extendida, siempre está glicosilado. Encontramos que HR1 y HR2 de NSm insertaron 27.04 ± 4.53% y 14.24 ± 3.99%, respectivamente, de las moléculas en la membrana. La naturaleza de los dominios citosólico / luminal se examinó adicionalmente mediante digestiones con proteinasa K. El tratamiento con PK degrada los dominios de las proteínas de membrana que sobresalen hacia el citosol, pero los dominios embebidos en la membrana o expuestos luminalmente están protegidos. La adición de PK a las mezclas de traducción derivadas de Lep generó una banda residual que se originó en la construcción que contenía HR2, que correspondía al fragmento HR1-P2 glicosilado protegido. Estos resultados sugieren que las regiones hidrófobas de NSm se insertan de manera más eficiente que las regiones correspondientes de MP de TMV y PNRSV, pero no tan bien como la capacidad de extensión de membrana requerida para la disposición de TM que se ha observado para virus de plantas con varios MP integrales pequeños.