Estructura molecular del humano P

Comparado con el coeficiente de permeabilidad de los fármacos de referencia, el Peff (1,90 ± 8,63) × 10-5 cm / segundo fue similar al Peff del atenolol (un fármaco de baja permeabilidad), pero significativamente menor que el del metoprolol (un fármaco de permeabilidad). En la Figura 3, tanto los inhibidores de la P-gp verapamilo como la CsA aumentaron significativamente la permeabilidad de la periplocina, mientras que los inhibidores de MRP2 indometacina y probenecid y el inhibidor de BCRP novobiocina no mostraron efectos obvios sobre la absorción intestinal de la periplocina. La figura muestra algunos de los transportadores que se encuentran en el lado apical de los enterocitos en el intestino delgado. La glicoproteína P (P-gp) es un transportador de salida que toma moléculas de fármacos del citoplasma celular y las transporta de regreso a la luz intestinal para su excreción.

• Para investigar el papel de estas hélices en la función de transporte de P-gp, sustituimos un grupo de 14 residuos conservados con alanina y generamos un mutante denominado 14A.
• Las hélices transmembrana homólogas 6 y 12 de la P-gp humana conectan los dominios transmembrana con sus dominios de unión a nucleótidos, y varios residuos en estas TMH contribuyen al bolsillo de unión al fármaco.
• La glicoproteína P (P-gp), también conocida como ABCB1, es un transportador de la membrana celular que media la salida de fármacos anfipáticos químicamente diferentes y confiere resistencia a la quimioterapia en la mayoría de los cánceres.
• Las pruebas de citotoxicidad con otros fármacos mostraron que las células que expresan el mutante 14A están ligeramente sensibilizadas a paclitaxel y doxorrubicina, pero no a colchicina o etopósido, lo que confirma la especificidad limitada de la función de importación del mutante.
• Este resultado confirma que un transportador de eflujo ABC diseñado puede funcionar como importador, aumentando así la acumulación de fármacos de quimioterapia en las células cancerosas, lo que conduce a la muerte celular.

El polipéptido transportador de aniones orgánicos y el transportador de cationes orgánicos son transportadores de captación que median el transporte de moléculas al interior de la célula. Además del enterocito, estos y otros transportadores se encuentran en el lado apical de las células tubulares renales y los canalículos biliares. Los transportadores también se pueden encontrar en la superficie luminal de las células endoteliales capilares en el cerebro y en las células tubulares renales. La cinética de activación de ATPasa de verapamilo bifásico que se muestra en las Figuras 2 y 6 sugiere un sitio de unión de verapamilo de alta y baja afinidad en Pgp.

El nilotinib inhibe el flujo de paclitaxel de forma más eficaz que el imatinib y el dasatinib

Se observaron picos de RMN de STDD significativos para varios protones (por ejemplo, 1 ””) que emanan de los azúcares y el protón del grupo funcional furan-2-ona. El factor de amplificación de STDD más alto se observó para el protón que está cerca del enlace 1,4 β con un factor de amplificación de STDD de ∼8. Para investigar el efecto del verapamilo sobre las interacciones de digoxina con el transportador, se añadieron 8 µM de verapamilo a muestras que contenían proteína y 250 µM de digoxina en las Figuras 5E y 5F. Las amplitudes relativas del espectro de RMN de STDD fueron bastante similares al espectro de RMN de STDD tomado sin verapamilo 8 µM.

Un nuevo método in vivo para estudiar P

Varios estudios han identificado residuos agrupados cerca del lado extracelular de Pgp [97-99] y G185, que se encuentra en la región transmembrana de Pgp, que tienen efectos marcados sobre la activación inducida por verapamilo de la hidrólisis y el transporte de ATP. La deleción de residuos entre 78 y 97 cerca del lado extracelular de la Pgp humana provocó un aumento dramático en la Km para la activación de ATPasa por verapamilo. Múltiples mutaciones cerca del lado extracelular de la Pgp humana disminuyeron la actividad hacia el transporte de verapamilo. Se observó activación permanente de ATPasa de Pgp humana en Pgp humana sin cisteína con una mutación I306C marcada con un análogo de verapamilo reactivo con tiol. La mutación del residuo G185 tuvo efectos muy fuertes sobre el VMAX de la activación de ATPasa inducida por verapamilo. La mutación también tuvo efectos significativos sobre el Ki para la inhibición del sustrato del verapamilo, pero efectos insignificantes sobre el Km del verapamilo. Al afectar a la Ki y no a la Km, nos sugirió que la mutación está afectando un sitio alternativo de unión al verapamilo.

Por tanto, las concentraciones bajas de verapamilo no perturbaron significativamente la orientación unida de digoxina a Pgp. Sin embargo, las amplitudes absolutas del espectro de RMN de STDD y los factores de amplificación disminuyeron ~ 50% en presencia de verapamilo 8 µM. Esta disminución se atribuyó a una fracción de moléculas de verapamilo que compiten con la digoxina unida a Pgp ya pequeños errores en la medición de las proporciones fármaco / proteína. El efecto de concentraciones más altas de verapamilo sobre la interacción de digoxina con Pgp se muestra en las Figuras 5G y 5H. No se observaron picos de RMN de STDD de digoxina en el espectro de RMN de STDD, lo que indica un desplazamiento completo de digoxina de Pgp. Los factores de amplificación STDD del verapamilo fueron muy similares al espectro de RMN 1H STDD sin digoxina.

Las interacciones fármaco-fármaco que involucran terapias cardiovasculares y su toxicidad relacionada continúan representando serios desafíos para el tratamiento eficaz de pacientes con enfermedades cardíacas [1-5]. En un estudio anterior, las DDI de la coadministración de fármacos cardiovasculares estuvieron implicadas en aproximadamente el 50% de las reacciones adversas al fármaco elaspirador-escoba.com en los pacientes que reciben terapia. El transportador de glicoproteína P es una bomba de eflujo impulsada por ATP que desempeña un papel importante en las DDI cardiovasculares y expulsa una amplia gama de tratamientos cardiovasculares. El transportador se expresa en el cerebro, los intestinos, el hígado, la placenta y los riñones y en niveles relativamente bajos en el corazón.

Con esta información, el sitio de unión al fármaco de alta afinidad se coloca aproximadamente cerca del lado extracelular de Pgp, mientras que el sitio de unión al fármaco de baja afinidad está más cerca de los NBD dentro de la región transmembrana del transportador en la Figura 7A. La Figura 6 muestra un modelo DDI y curvas de actividad de ATPasa acopladas a Pgp con un panel de concentraciones de digoxina y verapamilo. El modelo que se muestra en la Figura 6A fue el más simple que abarcó los resultados de la actividad ATPasa, la fluorescencia intrínseca del triptófano y los experimentos de RMN de STDD. En el modelo, dos moléculas de verapamilo se unen a Pgp, lo que es consistente con la cinética de hidrólisis de ATP bifásica que se muestra en la Figura 2.

Interacciones de verapamilo y digoxina con Pgp determinadas por Stdd Nmr

Aquí presentamos un enfoque computacional que combina estudios de acoplamiento con modelado cinético de acción masiva para investigar cómo los inhibidores de la quinasa pueden inhibir la salida de paclitaxel mediada por P-gp. Los resultados muestran consultarif.com que la inhibición se puede atribuir a la competencia entre paclitaxel y un inhibidor de tirosina quinasa por el dominio de unión al sustrato, así como a la competencia entre el inhibidor de quinasa y ATP por el dominio de unión nuclear.

El modelo también muestra que el verapamilo y la digoxina se unen simultáneamente a Pgp (es decir, el complejo enzimático verapamilo-digoxina). Esto está respaldado por el hecho de que la digoxina KD no se altera significativamente a concentraciones bajas de verapamilo y también es compatible con la inhibición no competitiva del transporte de digoxina por el verapamilo. En el modelo, concentraciones más altas de verapamilo desplazan lasceldasfotovoltaicas.com competitivamente la digoxina de su sitio de unión en Pgp. Se observó un desplazamiento competitivo de digoxina por verapamilo a 50 µM de verapamilo en las mediciones intrínsecas de triptófano de Pgp. También se demostró en el espectro de RMN de STDD en la Figura 5G por la falta de picos de RMN de STDD de 1H digoxina. Las Figuras 5C y 5D muestran el espectro de RMN de STDD y los factores de amplificación de digoxina 250 µM con Pgp.