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La permeación de F- se ha estudiado poco, pero el antiportador CLC-ec1, el canal de Cl de mamíferos CLC-1 y un canal de CLC de Entamoeba histolytica catalizan la conducción de F baja pero no despreciable. Por el contrario, los antiportadores CLCF prefieren mucho F- sobre Cl- en las condiciones utilizadas aquí, una selectividad iónica especialmente intrigante desde una perspectiva química bioinorgánica. F-, fuertemente hidratado en solución acuosa (ΔH ∼ -125 kcal / mol, 35 kcal / mol más fuerte que para Cl-) es tan reacio a deshacerse de su capa de agua que ha sido difícil desarrollar compuestos huésped-huésped selectivos para F- sobre Cl-. Se presentan datos de eflujo representativos de los homólogos indicados para F- o Cl- controlados por dispersión de luz.

• coli contra la toxicidad F- y que, en contraste con lo esperado, todas son antiportadores acoplados a protones.
• • Se deben usar proteínas transportadoras y cotransportadoras activas para mover la sacarosa hacia las células compañeras y los tubos de criba del floema en la fuente porque se mueven contra el gradiente de concentración.
• Además, debido a que las proteínas CLCF, como todas las CLC de tipo canal conocidas, tienen valina en la posición conservada que se cree que distingue los canales de los antiportadores, buscamos confirmar experimentalmente estas CLC como canales F-.
• Por último, el intercambio F- / H se produce con estequiometría 1∶1, en contraste con el valor habitual de 2∶1.
• Uno de estos homólogos, que permite un estudio detallado mediante registro eléctrico, muestra una estequiometría de intercambio 1 a 1 F- / H sin precedentes.
• Encontramos que las proteínas CLCF estudiadas aquí protegen a E.

El gradiente de protones se disipó con cianuro de carbonilo p-trifluorometoxifenilhidrazona 1 µM después de que la absorción había alcanzado el estado estacionario, y el transporte de H se calibró con una solución estándar de HCl. Aunque un antiportador CLC vegetal recientemente descubierto con treonina en esta posición en lugar de glutamato debilita la utilidad de esta secuencia, los CLCF proporcionan el primer ejemplo de una valina de pluma PIGG en antiportadores acoplados a protones. Sobre esta base, nos apresuramos a degradar esta secuencia de firma a un mero indicador mecánico.

La sorprendente violación de la estequiometría 2 a 1 en CLCF-eca socava esta generalidad. Las demandas de la grabación de bicapa plana nos obligan a someter solo un único CLCF a análisis electrofisiológico, pero sospechamos por las similitudes filogenéticas entre estas proteínas que la estequiometría 1 a 1 resultará ser una característica común de los antiportadores F- / H. Sin embargo, varios informes recientes han proporcionado evidencia de que la absorción de F del intestino delgado de la rata es insensible al pH luminal. Presentamos aquí nuestra evidencia de que la captación de F por las vesículas de la membrana del borde en cepillo intestinal del conejo se produjo rápidamente y con un sobreimpulso solo en presencia de un gradiente de protones dirigido hacia adentro. En ausencia de un gradiente de protones o en presencia de un gradiente dirigido hacia afuera, la captación de F fue lenta y sin sobreimpulso.

Nos especializamos en carga de fondo de tolva a granel y operamos en el Medio Oeste Superior, los Estados del Sur y Canadá. Nuestro amplio conocimiento combinado del mercado agrícola, nuestra reputación de confiabilidad y servicio al cliente de primer nivel, han llevado a F Los liposomas se prepararon con una solución interna de KF 300 mM, Hepes 10-25 mM, pH 7. La solución extraliposomal se cambió por K 300 mM o isetionato de Na, Hepes 1 mM, pH 7,2 y se diluyó 20 veces en 1,9 ml de la mismo búfer. Tras la adición de Vln, se controló continuamente la absorción de protones en una celda agitada mediante un electrodo de vidrio como un aumento del pH de la solución externa.

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Somos F

En presencia de un gradiente de protones dirigido hacia adentro, la captación de F fue parcialmente inhibida por DIDS y DEP pero no por diBAC. PCMBS inhibió la captación de F hasta en un 83% en una forma de respuesta a la dosis. DiBAC pareció reducir ligeramente el pH intravesicular, pero los otros reactivos no tuvieron efecto. Cuando el tampón de absorción contenía cloruro o nitrato, la absorción de el-humidificador.com F se inhibió parcialmente en comparación con los controles de manitol o gluconato. Se concluyó que el transporte de F a través del BBMV intestinal del conejo se produce mediante un proceso mediado por un portador que puede implicar el cotransporte de F con H o el intercambio de F con OH-. Los efectos inhibidores de DIDS, DEP y PCMBS pueden ocurrir al afectar este transporte mediado por portadores.

Cada conjunto de datos se registró con un tiempo de evolución de 100 ms, un retardo entre escaneos de 1 s junto con ocho escaneos por transitorio, dando lugar a un tiempo de adquisición neto de aproximadamente 9 s por espectro. Después de registrar el primer espectro para cuantificar las señales F internas / externas iniciales, se inició el transporte de F añadiendo 1 µM de Vln al tubo de RMN con una breve agitación.

Somos F

La proteína se purificó adicionalmente en una columna de filtración en gel Superdex200 en NaCl 100 mM, NaF 10 mM, ácido (2-acetamido) iminodiacético 10 mM, pH 6,5, DM 5 mM. Las proteínas que eluían como picos monodispersos en las posiciones esperadas para un homodímero de CLC se llevaron adelante para el análisis funcional. Los proteoliposomas se formaron por diálisis de la mezcla micelar de proteína (20-100 μg / mL), lípido polar de E. coli (10 mg / mL), DM 5 mM contra la solución intraliposomal deseada a temperatura ambiente durante 36 h. Los liposomas se almacenaron en alícuotas a -80 ° C hasta el día de su uso. Antes de los ensayos funcionales, los liposomas se extruyeron 21 veces a través de un filtro de membrana de 400 nm.

Después de un tiempo muerto de 15 a 20 s necesario para reinsertar la muestra en el espectrómetro, el flujo de F- fue seguido por el registro de 128 espectros durante aproximadamente 20 minutos en condiciones de estado estacionario. Se utilizó el paquete de software NMRPipe / NMRDraw para procesar los datos de RMN y cuantificar las intensidades de los picos. Una última rareza de las proteínas CLCF es su estequiometría 1 a 1 F- / H sin precedentes. Todos los mecanismos de transporte propuestos previamente para los antiportadores CLC incorporan los contramovimientos coordinados de dos iones Cl- con un H como característica fundamental de la maquinaria de intercambio CLC (28⇓ – 30).