Transporte

Los mutantes de Mla demuestran una acumulación de Gpl recién sintetizada en el Im

Para ambas proteínas, la mayoría de las hélices están bien resueltas, lo que nos permitió colocar los modelos de forma inequívoca. Curiosamente, la disposición de MlaF se parece claramente al estado de pretranslocación de MalK. Esto sugiere que hemos atrapado una conformación similar del complejo abMlaBDEF. Es posible que MlaD y / o MlaF, para los que no existen equivalentes en otros transportadores ABC, estabilice esta conformación. Alternativamente, es posible que la presencia de detergentes, que estaban presentes para solubilizar el complejo, imite el ligando natural en el sitio activo del transportador. Finalmente, la región transmembrana del mapa está bien resuelta y la densidad de las hélices transmembrana se puede identificar claramente.

Por lo tanto, realizamos una clasificación 3D adicional que condujo a un conjunto de datos más pequeño de ~ 8000 partículas. Esto produjo una estructura de menor resolución (~ 11,5 Å) pero con las seis hélices de TM N-terminales de MlaD claramente visibles. Mientras que el dominio periplásmico posee una simetría de 6 veces, los dominios TM de MlaD no parecen simétricos, con dos formando estrechos contactos con la densidad atribuida a MlaE mientras que los otros cuatro no parecen entrar en contacto con ninguna otra proteína. Esta observación probablemente explica hacerbafles.info la asimetría de los contactos entre el MlaE dimérico y el MlaD hexámero. Se requerirá una estructura de mayor resolución para determinar si se forman contactos adicionales entre los bucles que miran hacia afuera de MlaE y el dominio periplásmico de MlaD. El sistema de la fosfotransferasa está involucrado en el transporte de muchos azúcares a las bacterias, como glucosa, manosa, fructosa y celobiosa. Los azúcares PTS pueden diferir entre grupos bacterianos, reflejando las fuentes de carbono más adecuadas disponibles en el medio ambiente que cada grupo evolucionó.

coli posiblemente podría poner nuestro modelo en conflicto directo con el paradigma actual y requerir una carga de prueba extremadamente alta que requiera experimentos adicionales que podrían retrasar aún más la publicación de los datos panelessolares-precios.com que ya tenemos. En el trabajo actual, los autores continuaron caracterizando el complejo de la membrana interna Ab Mla a través de cyro-EM. En opinión de este revisor, esta es la contribución más sustancial del trabajo actual.

• meningitidis, Helicobacter pylori y V. cholerae, ha tenido un éxito limitado o nulo (25, 74,-76).
• Por lo tanto, las proteínas MCE parecen ser de importancia crítica para la función de la OM, pero su función y mecanismo de acción precisos siguen sin estar claros.
• Por el contrario, las proteínas MCE están ausentes en bacterias unidas por una sola membrana.
• La separación depende de la relación proteína-lípido y la composición de lípidos, aunque el proceso en sí está lejos de ser una fórmula.

El modelo de dímero de MlaE resultante se ajusta bien a la densidad del mapa EM (Figura 2, suplemento de la figura 4C) y claramente corresponde a un transportador cerrado, sin canal mantenimiento de flota de disolvente entre las subunidades. Curiosamente, también notamos una densidad clara para tres hélices de TM que probablemente corresponden a las hélices N-terminales de MlaD.

Sin embargo, les faltó continuidad y observamos que solo dos forman una interacción directa con MlaE. Es posible que esto se deba a la heterogeneidad en la orientación de MlaD en relación con el resto del complejo. Para verificar esto, realizamos una clasificación 2D adicional de las partículas utilizadas para la reconstrucción, que reveló un rango de posiciones para la región MlaD en relación con el resto del complejo.

En el caso de la literatura que se discute a continuación con mayor detalle, tendremos en cuenta en la redacción del manuscrito este artículo adicional que se publicó después de que enviamos el manuscrito, aunque no creemos que nuestros resultados estén en conflicto con él. En cuanto a la separación de membranas, ejecutamos controles para la separación de las membranas externa e interna que deberían haberse incluido en el manuscrito original, y son muy convincentes porque muestran que podemos separar las membranas, y esto debería disipar las preocupaciones al respecto. En resumen, mientras que la formación de ampollas en la membrana externa o la degradación de lípidos pueden influir en el contenido total de lípidos, no se esperaría que se dirija específicamente a lípidos marcados o no marcados y, por lo tanto, no afectaría las proporciones presentadas. Además, también discutimos en detalle a continuación por qué el etiquetado inicial puede tener variabilidad, pero cómo se controla de manera similar mediante la medición de proporciones de lípidos etiquetados. Esperamos que esto disipe las preocupaciones de los revisores y editores y nos permita publicar este trabajo, que probablemente sea de interés para el campo y estimule el discurso sobre este tema. Agradecemos la sugerencia del revisor y estamos de acuerdo en que sería interesante repetir nuestros experimentos en Enterobacteriaceae.

Procesamiento Cryo Em de Mlafedb

Sin embargo, el enfoque de nuestro estudio son los mecanismos de permeabilidad de la membrana externa en Acinetobacter, y como tal, hemos escrito este manuscrito para presentar nuestros hallazgos sobre el sistema Mla en ese organismo. Si bien tenemos datos preliminares de que la función del sistema puede ser similar en Salmonella typhimurium, creemos que repetir este trabajo en otro organismo estaría más allá del alcance de este manuscrito y podría servir como base de otro manuscrito por completo. También nos gustaría señalar que hemos hecho esfuerzos para explicar que, si bien creemos que el sistema funciona principalmente para el transporte anterógrado en lugar del retrógrado de GPL, no hemos eliminado la posibilidad de que el sistema desempeñe algún papel en el mantenimiento de la membrana externa. En particular, la función molecular precisa del componente de la membrana externa del sistema, MlaA, no está del todo clara, y es posible imaginar que podría estar facilitando de alguna manera tanto el mantenimiento de la asimetría de lípidos como la transferencia de GPL de MlaC al exterior. No es nuestra intención presentar estos datos para avivar la controversia, sino publicar lo que hemos observado sobre la función de este sistema en Acinetobacter.

Transporte Lps a través del sistema de vías de transporte Lps

Anteriormente, Ekiert y sus colaboradores caracterizaron múltiples complejos que contienen dominios MCE, incluido el complejo Mla, y el trabajo completado aquí es una buena adición al campo. Desafortunadamente, los otros hallazgos reportados aquí son muy problemáticos. Los autores llegan a la conclusión de que Mla funciona como un transportador de fosfolípidos anterógrado, que está en conflicto directo con trabajos previos de múltiples grupos que sugieren que Mla funciona de manera retrógrada, incluido un artículo reciente en A. Los mutantes Mla presentados aquí tienen fenotipos muy diferentes a los reportados para otros Gram-negativos y los datos bioquímicos para respaldar la afirmación anterógrada no son convincentes por varias razones. A continuación, modelamos las estructuras de MlaB y MlaF y ajustamos sus respectivas coordenadas en la región correspondiente del mapa EM (Figura 2C y Figura 2 – figura suplementaria 3A).