Transporte intermembrana

Otra es la enzima palmitoil transferasa PagP, que acila el lípido A usando un palmitato de un donante de GPL como sustrato. Un análisis estructural minucioso revela que los sitios activos de estas enzimas solo son accesibles para las GPL en el prospecto exterior. El complejo de Bam es un complejo de la membrana externa que media el plegado y la inserción de Omps en la membrana y ha sido objeto de varias revisiones. Las 2 proteínas esenciales de este complejo, BamA y BamD, son un barril β y una lipoproteína, respectivamente. Se cree que las proteínas accesorias adicionales median el plegamiento o la especificidad del sustrato, pero no están completamente conservadas ni son esenciales para funcionar en bacterias Gram negativas. Se cree que Bam facilita el plegamiento al alterar la dinámica de la membrana junto con la inserción dirigida del péptido Omp orientado.

En segundo lugar, los lípidos pueden translocarse a lo largo de un surco hidrófobo en un puente entre el MI y el OM, como en el transportador de LPS. Y tercero, los lípidos pueden ser transportados a través del interior de túneles cerrados alargados formados por proteínas de dominio MCE grandes, como en PqiB y YebT. baumannii que son esenciales para su barrera OM que condujo a la identificación de un sistema de transporte ABC cuya actividad ATPasa mantiene la función de barrera OM. Los componentes IM y periplásmico de este sistema se pueden purificar, unir GPL y ensamblar en un complejo de proteínas definido con una simetría significativa, lo que indica que este sistema podría funcionar para transportar GPL desde el IM al OM. De acuerdo con la posibilidad de que Mla funcione como un transportador anterógrado, el OM de los mutantes muestra una reducción general de GPL junto con una acumulación excesiva de GPL recién sintetizada en el IM. Por tanto, estos resultados nos llevan a proponer que la función del sistema A.

Sin embargo, los datos disponibles apuntan más claramente a un modelo de transporte de GPL anterógrado por MlaFEDB y MlaC, facilitado de alguna manera por MlaA. Estos datos estructurales nos permiten generar un modelo de cómo los sistemas de transporte MCE trafican lípidos a través del periplasma. Sin embargo, como la dirección de transporte no se ha establecido de manera absoluta, estos sistemas también podrían impulsar la importación de lípidos hacia la membrana interna, con los pasos descritos en el orden inverso. La unión de MlaC al complejo MlaA-OmpC / OmpF unido a lípidos da como resultado la transferencia del lípido al bolsillo hidrófobo genograma.top de MlaC, donde está protegido del disolvente. El MlaC unido a lípidos puede luego difundirse a través del periplasma hasta el complejo MlaFEDB en el MI, donde la hidrólisis del ATP puede facilitar la extracción del lípido de MlaC y / o la translocación del lípido en el MI. Por lo tanto, parece que se han desarrollado al menos tres estrategias únicas para el transporte de lípidos entre el MI y el MO de las bacterias de doble membrana y los cloroplastos. En primer lugar, se puede emplear una proteína transportadora de lípidos soluble como MlaC, con una bolsa hidrófoba que acepta las colas de lípidos, protegiéndolas del disolvente a granel.

Para tener en cuenta la diferencia de energía, se propone una molécula aceptora hidrófoba para permitir que los lípidos se disocien completamente del resto del transportador ABC y facilitar la eliminación completa de la bicapa. La estrecha asociación de MlaD con la valva externa del MI puede permitirle extraer lípidos del MI por interacción hidrófoba con las cadenas de acilo después de la hidrólisis del ATP por MlaF. El tráfico posterior a través del periplasma implica entonces a la proteína de unión a GPL periplásmica MlaC, que probablemente acepta GPL de MlaD y luego las lleva al OM. Si bien aún no se conoce el mecanismo preciso de la inserción de GPL en el OM, el trabajo realizado en el sistema E. coli Mla ha demostrado que MlaC interactúa tanto con el complejo IM MlaFEDB como con la lipoproteína OM putativa MlaA, y nuestros resultados respaldan un papel para MlaA en la función del sistema Mla general y la entrega de GPL al OM.

• Independientemente del papel funcional del colesterol en la invasión, se cree que la abundancia y el número de proteínas del dominio MCE en M.
• La primera proteína del dominio MCE se caracterizó inicialmente por un estudio histórico en 1993 que identificó una región del genoma de Mycobacterium tuberculosis que confería la capacidad, cuando se expresaba heterólogamente en E.
• En corroboración con este resultado, se demostró que una deleción de mce4 era defectuosa para la captación de colesterol.
• identificaron genes regulados positivamente durante el crecimiento con colesterol, uno de los cuales fue el grupo de genes mce4ABCDEF.

Cepas y condiciones de crecimiento bacteriano

Nuestros resultados usando este ensayo son consistentes con el funcionamiento del sistema Mla como un transportador de GPL anterógrado, sin embargo, no excluyen la posibilidad de un papel dual para los componentes Mla en el mantenimiento de la asimetría de lípidos OM. Se ha interpretado que el trabajo previo realizado en el sistema ortólogo Mla en E. coli sugiere que la función del sistema es eliminar la GPL del prospecto exterior del OM para el transporte retrógrado de regreso al citoplasma basado en la observación de que E. coli mla los mutantes probablemente contienen GPL en el prospecto exterior del OM. Esta función propuesta se infirió a partir de la observación de que las deleciones de genes dieron como resultado un aumento de la activación de las enzimas OM-fosfolipasa PagP y OMPLA, lo que sugiere una mayor cantidad de GPL en el prospecto exterior de la OM.

Los mutantes de Mla demuestran una acumulación de Gpl recién sintetizada en el Im

El gen de MlaA, el componente de OM propuesto, se encuentra en una ubicación cromosómica diferente del resto del operón mla. La estructura propuesta de MlaA en el OM apoya el argumento de que MlaA está involucrado en la eliminación de GPL del prospecto exterior, y se sugiere que GPL del prospecto exterior viaje a través de un poro en MlaA donde son recibidos por MlaC, sin embargo, nuestros datos revela que los mutantes ∆mlaA de A. Estos datos pueden conciliarse mediante un modelo en el que MlaA funciona tanto para eliminar la GPL mal localizada del prospecto exterior del OM, y además sirve para facilitar la entrega de GPL al OM por MlaC, quizás al permitir la localización de MlaC en la superficie del interior.

Función de los residuos de aminoácidos conservados

Según este modelo, las mutaciones en MlaA serán fenotípicamente similares a las mutaciones en otros componentes del sistema Mla, y esperaríamos observar una tasa disminuida de transporte de GPL anterógrado. Está establecido que existen mecanismos celulares en bacterias Gram-negativas para resistir condiciones estresantes que conducen a la alteración de la MO. Por ejemplo, las enzimas fosfolipasa de OM, como PldA, se activan en condiciones de estrés de la membrana para digerir la GPL en la valva exterior de la MO, ya que los niveles altos de GPL en la valva exterior desestabilizan la función de barrera de la OM.

baumannii Mla es el tráfico de GPL desde el MI, a través del periplasma, para su entrega a la membrana externa. De acuerdo con este modelo, la hidrólisis de ATP por MlaF proporciona la energía inicial para extraer GPL del MI, mientras que los componentes de unión al sustrato MlaD y MlaC absorben lípidos para entregarlos al MO.

Aunque este modelo requiere validación experimental, es necesario un sistema vaporetade-mano.com Bam funcional para el plegado y la localización adecuados de Omps in vivo.